脐带间充质干细胞治疗失代偿期肝硬化12例临床疗效观察

目的探讨脐带间充质干细胞在失代偿期肝硬化治疗方面的疗效。方法：采用贴壁法分离培养脐带间充质干细胞，静脉输注移植入１２例乙型肝炎失代偿期肝硬化患者体内，观察临床症状，检测肝功能指标（ＡＬＴ、ＡＳＴ、总胆红素、白蛋白、胆碱酯酶）的变化。结果治疗后1２周，试验组肝功能指标评估改善显著高于对照组（犘＜０．０５），其中白蛋白指标改善尤为明显（治疗前：ＡＬＴ（６８．１７±３２．３１）Ｕ／Ｌ、ＡＳＴ（６３．７１±１７．５３）Ｕ／Ｌ、总胆红素（３９．６２±７．９４）μｍｏｌ／Ｌ、白蛋白（３３．２３±２１．８６）ｇ／Ｌ、胆碱酯酶（７５６２．３７±２４７５．５２）Ｕ／Ｌ；治疗１２周后：ＡＬＴ（２７．４２±１３．１８）Ｕ／Ｌ、ＡＳＴ（３６．７４±１３．５８）Ｕ／Ｌ、总胆红素（２０．１７±１１．４９）μｍｏｌ／Ｌ、白蛋白（６３．９１±２１．０６）ｇ／Ｌ、胆碱酯酶（８５３２．８４±２７３１．９４）Ｕ／Ｌ。结论:脐带间充质干细胞移植安全可行，并能够有效改善肝硬化患者临床症状，对肝组织功能具有良好的修复作用。

近年来，随着干细胞研究的兴起，国内外陆续有关于干细胞临床应用的报道［１-３］，但多局限于短期的疗效观察，缺乏严格的对照。本研究对乙肝肝硬化患者采用脐带间充质干细胞经静脉输注移植联合传统的抗病毒等综合治疗方法，对其治疗后半年临床疗效进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择２０１７年１０月至２０１８年３月山东医专附属医院收治的失代偿期肝硬化患者１２例，其中男性８例，女性４例，年龄４８～７８岁，平均年龄５７．４岁。１２例患者均为乙型肝炎肝硬化，ＣｈｉｌｄＰｕｇｈ分级：Ｂ级５例，Ｃ级７例。所有患者均行腹部Ｂ超和（或）ＣＴ 检查，实验室检查包括 ＡＬＴ、ＡＳＴ、总胆红素（ＴＢｉｌ）、白蛋白（Ａｌｂ）、胆碱酯酶（ＣＨＥ）［４６］。所有患者进行干细胞移植治疗前均给予传统控制水钠摄入、保肝、纠正低蛋白血症等内科综合治疗，所有患者在知情同意情况下签署《知情同意书》。另选择１５例同时间段该院收治的失代偿期肝硬化患者，年龄４６-７３岁，平均年龄５６．８岁，只给予传统内科综合治疗，作为对照组。

1.2 移植方法

经计数和检测合格的细胞，洗涤３次，彻底去除培养基残留，按照５×１０７ 个／制剂的标准用生理盐水稀释制备成１５０ｍＬ细胞悬液。经静脉滴注，将含有脐带间充质干细胞的１５０ｍＬ生理盐水悬液注入到患者体内，滴速为４５～６５滴／ｍｉｎ，连续静脉滴注３次，每次间隔１周。

1.3疗效观察

观察指标主要包括以下几个方面：临床症状、体征和不良反应；干细胞移植术后１周、４周、１２周、２４周肝功（ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＢｉｌ、Ａｌｂ、ＣＨＥ）和Ｂ超等。

1.4数据分析

统计分析使用ＳＰＳＳ１８．０进行处理，数据结果以狓珔±狊表示，采用狋检验。

2 结果

2.1脐带间充质干细胞的鉴定

经分离培养的脐带间充质干细胞大小均匀，呈长形或梭形。经全自动细胞计数仪检测，间充质干细胞活率约为９３％，高于业内８５％的要求。培养细胞经流式细胞仪检测，检测结果ＣＤ２９＋ 、ＣＤ９０＋ 、ＣＤ１０５＋ 、ＣＤ３４－ 和 ＣＤ４５－ 等表面标志物提示目的细胞的比率分别为９９．９％、９９．９％、９９．８％、９９．９％ 和９８．０％，符合目的细胞不低于９５％的要求（图１）。

2.2 临床症状与体征变化

在接受干细胞治疗的试验组患者与对照组患者中，腹水、腹胀、下肢浮肿、纳差、乏力等临床症状均有不同程度的改善，在治疗后２４周左右，试验组患者改善程度高于对照组患者。此外，试验组患者中，有５例患者阐述其睡眠质量明显改善，４例患者出现面容好转。

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2.3 肝功能的变化

在干细胞治疗试验组患者和对照组患者中，肝功能指标均有不同程度的改善，在治疗后１２周时，除胆碱酯酶无明显变化外，试验组肝功能指标评估改善显著高于对照组（犘＜０．０５），其中白蛋白变化尤为明显，预示试验组肝脏储备功能改善良好，干细胞对患者肝脏功能起到良好的修复作用。在治疗２４周时，数据变化不再明显，两组患者对比差异无显著意义（犘＞０．０５）（见表１）。

2.4 不良事件与安全性

在所有接收脐带间充质干细胞移植治疗的患者中，移植成功率１００％，术后出现发热反应３例，均不超过３８℃，未给予处理，８ｈ后自动消退；出现精神亢奋１例，次日恢复正常；未发生感染和白细胞下降等情形。术后跟踪随访过程中，对照组因死亡失访１例。

3 讨论

 已有研究证实，干细胞在肝硬化环境中能够增殖分化［８］，且已有诸多将自体骨髓干细胞应用于治疗肝硬化患者的报道［７-８］。但考虑到肝硬化患者常伴有骨髓造血功能减退及骨髓增生不良，干细胞增殖分化能力下降，骨髓穿刺采集的骨髓干细胞数量很难达到干细胞移植治疗需要的细胞数量，而且患者病情严重，患者不能耐受采集大量骨髓液，也不安全［４］。与之相比，人脐带间充质干细胞具有取材方便，来源广，数量充足，增殖分化能力强，免疫原性低，干性维持良好［９］的优势，越来越受到医生和患者的重视。

本研究对１２例失代偿期肝硬化患者，使用脐带间充质干细胞进行静脉输注移植治疗，治疗后随访结果显示，接收干细胞治疗的多数患者临床症状腹水消退，腹胀、下肢浮肿减轻、食欲和体力改善明显；肝功能较治疗前也有明显好转，且较对照组改善具有显著差异性。研究结果表明，脐带间充质干细胞移植治疗能良好修复肝损伤，改善肝功能，并且安全可行，无不良风险。

目前，脐带间充质干细胞移植治疗肝硬化作为一种新的治疗方法尚处于临床探索阶段，报道的研究普遍存在病例数量较少，跟踪随访时间较短，缺乏对照和远期疗效评级不足等问题。本试验虽然设置了对照组，但也存在数量较少，跟踪时间较短等缺陷。脐带间充质干细胞移植治疗肝硬化长期疗效评价还需要大量样本和严格的对照研究，建立标准化移植方式、细胞数量等问题还需进一步研究和探讨，促进干细胞移植后的完全转化以更有效的重建和改善肝组织和肝功能也是今后研究的重点工作内容。

参考文献

［１］ 姚鹏，王帅，胡大荣，等．肝动脉自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化３０例．世界华人消化杂志，２００５，１３：１６３９-１６４１．

［２］ 乔飞，张馨，盛云峰，等．脐带血干细胞治疗肝硬化失代偿期疗效观察．中国肝脏病杂志电子版，２０１１，３：１０-１４．

［３］ 陈海鸥，胡小宣，刘洪娟，等．脐血干细胞移植治疗肝硬化的疗效观察．肝脏，２０１０，１８（７）：５３７-５３９．

［４］ 曾芝雨，李东良，方坚，等．脐带间充质干细胞联合骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化：１年随访对照．中国组织工程研究，２０１５，１９：１５３３ １５３８．

［５］ 赵文静，张淑芹，刘淑荣，等．自体骨髓干细胞移植治疗终末期肝病５６例临床观察．中西医结合肝病杂志，２０１４，２４：９-１２．

［６］ 陈曦，孙国军，赵文静，等．自体骨髓干细胞治疗终末期肝病２４例临床观察．临床肝胆病杂志，２０１２，２８：５５５７．

［７］ ＷａｎｇＨＳ，ＨｕｎｇＳＣ，ＰｅｎｇＳＴ，ｅｔａｌ．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｗｈａｒｔｏｎ’ｓｊｅｌｌｙ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎｕｍ ｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄ．ＳｔｅｍＣｅｌｌｓ，２００４，２２：１３３０-１３３７．

［８］ 欧阳石，刘树人，程涛，等．自体骨髓间充质干细胞肝动脉移植治疗失代偿期肝硬化．中国组织工程研究，２０１３，１７：６４５５-６４６１．

［９］ Ｃｈｅｎ Ｈ，Ｚｈａｎｇ Ｙ，Ｙａｎｇ ＺＪ，ｅｔａｌ．Ｈｕｍａｎ ｕｍｂｉｌｉｃａｌｃｏｒｄ

Ｗｈａｒｔｏｎ’ｓｊｅｌｌｙ -ｄｅｒｉｖｅｄｏｌｉｇｏｄｅｎｄｒｏｃｙｔｅｐｒｅｃｕｒｓｏｒ -ｌｉｋｅｃｅｌｌｓｆｏｒ ａｘｏｎａｎｄｍｙｅｌｉｎｓｈｅａｔｈｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．ＮｅｕｒａｌＲｅｇｅｎＲｅｓ．２０１３，８：８９０-８９９．

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