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CNS图表复现06—根据CellMarker网站进行人工校验免疫细胞亚群

生信技能树 单细胞天地 2022-06-06

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我们的CNS图表复现之旅已经开始,前面5讲是;

如果你也想加入交流群,自己去:你要的rmarkdown文献图表复现全套代码来了(单细胞)找到我们的拉群小助手哈。

前面我们得知文章把Macrophage和Monocyte合并起来,把B_cell区分成为两群。而我们的T_cells和NK_cell也需要被合并起来。

首先检查Mast-cells

而 common myeloid progenitor (CMP) 这群细胞呢,在文章并没有出现,不知道是不是会被命名为 Mast-cells,需要相应的生物学背景。

这个时候,根据CellMarker网站进行人工校验,如下所示:

# Human Kidney Mast cell
# http://biocc.hrbmu.edu.cn/CellMarker/search.jsp?quickSearchInfo=mast 
genes_to_check = c('ENPP3''KIT''SLC18A2')
# All on Dotplot 
p <- DotPlot(sce, features = genes_to_check,group.by = 'seurat_clusters') + coord_flip()
p

发现就是第7群高表达这些基因,而前面我们的singleR的自动注释步骤把第7群细胞命名为了 common myeloid progenitor (CMP) ,所以它就文章里面的Mast-cells,出图如下:

然后看看B_cell区分成为两群

文章把B_cell区分成为两群,所以我们也区分一下:

前面的singleR的自动注释步骤的B_cell涵盖了Seurat流程的第3,10,13,15,19,21群细胞。

同样的,根据CellMarker网站进行人工校验,如下所示:

genes_to_check = c('CD19''CD27','SDC1''CD38')
# All on Dotplot 
p <- DotPlot(sce, features = genes_to_check,group.by = 'seurat_clusters') + coord_flip()
p
# CD138( SDC1), CD38 # Plasma cell
# CD19, CD27 # memory B cell

出图:

可以看到, 第3和21群高表达CD138( SDC1)基因,所以是Plasma cell,其它B细胞就归类为memory B cell吧,毕竟作者的文章就只有这两个B细胞亚群。

最后检查Macrophage和Monocyte

文章把Macrophage和Monocyte合并起来,但是数量是四千五百个细胞左右,但是我们的Macrophage和Monocyte加起来近5000了,所以里面理论上可以拆出来一些给DC细胞,所以我在CellMarker网站进行人工校验,基因如下:

# CLEC4C, IL3RA, NRP1 # Dendritic cell 
# CD1C, CST3, FCER1A # Monocyte derived dendritic cell
genes_to_check = c('CLEC4C''IL3RA''NRP1','CD1C''CST3''FCER1A')
# All on Dotplot 
p <- DotPlot(sce, features = genes_to_check,group.by = 'seurat_clusters') + coord_flip()
p

确实看到:

第9和13亚群,可以重新被划分为DC细胞,之前属于Monocyte和B细胞。

最后整理分群资料

可以看到,即使是singleR的自动注释后给每个亚群命名了,仍然是需要耗费时间和精力去细致看每个亚群。

# 9,13 Dendritic
# 3,12, Plasma cell
# 7, CMP --> Mast-cells




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